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PNA 與靶基因結(jié)合的高度親和性
發(fā)布時(shí)間:2017/7/26

PNA 是由特殊的多酰胺骨架與堿基通過亞甲羰酰鍵連接其骨架上的 , 因此此分子結(jié)構(gòu)不被核酸酶和蛋白酶識(shí)別、結(jié)合 , 所以 PNA 能抗酶的降解 ,在人血清、細(xì)菌提取物、埃氏腹水癌細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)抽提物中均無(wú)明顯降解 , 它抵抗真菌蛋白酶 K 、豬小腸黏膜蛋白酶分解的能力是對(duì)照肽類的 1 000 30, 并且在一個(gè)相當(dāng)大 pH 值范圍內(nèi) PNA 都是穩(wěn)定的 , 因此無(wú)論在體內(nèi)或體外 PNA 都能長(zhǎng)期存在。PNA DNA 的結(jié)合導(dǎo)致限制性內(nèi)切酶所需的特征結(jié)構(gòu)發(fā)生改變 , 從而序列專一性地抑制內(nèi)切酶對(duì)雙鏈的切割。利用 PNA 的這種性質(zhì)實(shí)驗(yàn)中當(dāng)富含胸腺嘧啶的純嘧啶 PNA 通過鏈取代機(jī)制與dsDNA雜交 , 使被取代的 DNA 鏈有單鏈性質(zhì) , 能被單鏈核酸酶 SI 降解 , 尤其當(dāng) dsDNA 上有兩個(gè)相連相鄰的PNA 靶序列時(shí) , 利用靶序列互補(bǔ)的 PNA 片段 , 就可使核酸酶 SI 選擇性地?cái)嗔?, 起到限制性內(nèi)切酶的作用。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明 , 當(dāng)同性嘧啶 PNA 寡聚體連接在一起形成所謂 PNA 夾子時(shí) , 鏈侵染的過程能夠識(shí)別雙股 DNA 中短于 7 個(gè)堿基長(zhǎng)度的同性嘌呤序列 , PNA 夾子結(jié)合到雙鏈 DNA , 就會(huì)阻止酶的作用。應(yīng)用一個(gè) PNA 夾子就能保護(hù)一段同源嘧啶靶子所覆蓋的專一性甲基化位點(diǎn) , 甲基化后再除去PNA 夾子 , 則相應(yīng)的限制酶就可以酶切這段 DNA ,因此只有夾子保護(hù)的那段甲基化酶作用位點(diǎn) , 才適合作為限制酶的底物。 Boyles&Salynn 等人利用此原理采用原位雜交的方法很有效地區(qū)分結(jié)核菌和非結(jié)核菌 ,V eselkov 等亦使用此原理在很專一的位點(diǎn)上酶切了酵母菌基因組 , 實(shí)驗(yàn)中當(dāng) PNA 寡聚體連接到固定相上時(shí) , 它親和捕獲堿基效果很好 ,Boffa等曾用這種方法獲得含有 CGA 重復(fù)序列的活性轉(zhuǎn)錄基因。



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